携带EphrinA1-caspase-3基因的重组腺病毒载体的构建和包装

解剖学杂志 ›› 2018, Vol. 41 ›› Issue (4) : 382-387.

论著

目的：构建携带ephrinA1-caspase-3基因的重组腺病毒载体,通过包装、扩增、鉴定,为后续开展目的基因靶向治疗乳腺癌研究奠定基础。方法：以pMD18TCasp3、pMD18T-EphrinA1为模板扩增caspase-3、EphrinA1基因，以pET28a为载体，通过双酶切、连接、转化、测序鉴定，构建pET28a-EphrinA1Casp3。然后以质粒pEC3.1(+)为载体，获得pEC3.1-EphrinA1-Casp3。采用LR体外同源重组，构建pAd-EphrinA1-Casp3，以HEK293包装和放大培养。结果：成功将PCR扩增的EphrinA1胞外端基因和人活性型caspase-3基因定向克隆入质粒pET28a,并将EphrinA1-caspase-3融合基因转移到穿梭质粒pEC3.1(+),获得pEC3.1-EphrinA1-Casp3载体；经过体外同源重组,成功构建携带EphrinA1-caspase-3基因的重组腺病毒载体pAd-EphrinA1-Casp3；并在HEK 293细胞中完成包装和扩增；获得重组腺病毒rAd-EphrinA1-Casp3。结论：利用GatewayTM技术成功构建重组腺病毒载体pAd-EphrinA1-Casp3,经HEK293细胞包装,获得重组腺病毒rAd-EphrinA1-Casp3。

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