大鼠microRNA-327重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的转染效率*

解剖学杂志 ›› 2019, Vol. 42 ›› Issue (3) : 244-248.

论著

目的：构建含微小RNA-327（miRNA-327）基因的腺病毒载体，并观察其在H9C2 心肌细胞中的转染效率。方法：利用聚合酶链反应（PCR）法钓取目的基因miRNA-327，并将目的基因与穿梭载体GV202连接形成miRNA-327腺病毒表达载体。经酶切及测序鉴定后，将构建的miRNA-327 腺病毒表达载体与包装质粒共转染到人胚肾293 细胞，再通过Cre/loxP 重组酶系统以获得重组腺病毒，并对其进行扩增、纯化及滴度测定。最后将构建成功的重组腺病毒载体转染H9C2 心肌细胞48 h，并通过荧光显微镜以及流式细胞仪测定其转染效率。结果：双酶切与测序结果证明了大鼠 miRNA-327腺病毒载体构建成功，且最终获得滴度为2×1010 PFU/ml的病毒液。转染心肌细胞48 h后倒置荧光显微镜观察结果显示，腺病毒转染效率为90.15%±5.15%，流式细胞仪检测结果显示其转染效率为85.46 %±3.08%。结论：成功构建了含miRNA-327基因的重组腺病毒载体，其在H9C2心肌细胞中具有较高的转染效率。

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